第1060章 颠覆性发现！神经免疫学领域将变天！
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直接在尾静脉注射fitC-右旋糖酐标记血管、注射罗丹明B标记细胞外间隙就行了。
没什么技术含量，研究生都能轻松驾驭。
“接下来，需要监测四项指标。”许秋说道。
其一，血脑屏障完整性。
这个很简单，直接用双光子实时成像血管渗漏就行。
第二，紧密连接蛋白Claudin-5。
Claudin-5是神经功能的守门人，从某种方面来说，血脑屏障的完整性与它有着密不可分的关系。
可以说，这个实验的重要指标，基本上都是靠Claudin-5验证的。
而检测Claudin-5本身，则是主要是靠免疫组化+westernblot（脑微血管）。
随后，是小胶质细胞活化，在皮层进行iba-1免疫荧光。
最后则是血清血脑屏障修复机制，利用气相色谱-质谱来判断，其涉及到了丁酸、乙酸的浓度，以及至关重要的Claudin-5基因敲除！
“这个方案……也做出了很多优化啊。”莫雷蒂有些愕然。
赖光圳等人也不禁点头，目中有着钦佩之色。
许秋的方法，和常规法子比起来，优势大上不少。
比如检验血脑屏障的完整性这一点。
常规手法，是监测分辨菌群的丰度。
而许秋则改换成了双光子实时成像血管渗漏，优点显而易见，便是可以动态观测血脑屏障修复过程。
其次，短链脂肪酸修复血脑屏障这一点，许秋对Claudin-5基因的敲除，堪称妙笔。
没有了Claudin-5基因，小鼠的血脑屏障应当会濒临崩溃。
此时补充短链脂肪酸，若是能够见到血脑屏障渗漏有所改善，则能证明，短链脂肪酸能够修复血脑屏障！
另外，监测小胶质细胞活化也有着巨大优势。
常规方法，只会在实验前、实验后查一次神经炎症。
但，活体小胶质细胞成像却可以实时追踪神经炎症消退。
这能清晰地反应阿克曼菌、短链脂肪酸等等在抗炎方面发挥的作用！
很快，各组实验小鼠都依然准备完毕。
第一件要做的事情，就是确定阿克曼菌已经定值成功，且血清丁酸上升。
经过检测，实验组的阿克曼菌，翻了将近七百倍。
而对照组用的是生理盐水，并无明显变化。
血清丁酸方面，实验组小鼠达到了85个单位，说明血清中丁酸含量已经达到可用的标准。
随后，是检测血脑修复的证据！
双光子成像显示，实验组渗漏面积比、与对照比相较而言，减少了百分之七十！
Claudin-5表达，westernblot灰度值上升百分之一百五十！
足足一点五倍。
这意味着，实验组的血脑屏障非常完整！
而evans蓝渗出，也仅仅只有3.1ug/g左右，差不多只有对照组的一半不到。
evans蓝渗出是能直接反映血脑屏障完整性的指标，这无疑进一步确定了短链脂肪酸对血脑屏障的修复作用！
而最后的神经炎症抑制……
经检测，iba-1免疫荧光实验组细胞数大约每视场只有28个，而对照则则有足足95个，下降了约百分之七十！
此外，脑脊液iL-6，实验组也远远低于对照组。
这两个指标，都意味着进行了阿克曼菌定植的实验组，在血脑屏障修复、神经炎症控制方面，都有着碾压一般的优势！
最终，就是给基因敲除小鼠做实验了。
按理说，敲除了Claudin-5基因后，小鼠的血脑屏障会逐步崩溃，神经炎症也会越发严重。
但，在灌胃丁酸后，小鼠的血脑屏障渗透却得到了明显的改善。
而且脑脊液iL-6也在大幅度下降！
这两个现象，让在场无数人都振奋不已。
前者，意味着短链脂肪酸的确可以修复血脑屏障。
而后者则代表，丁酸盐可独立抗炎！
“难怪控制得如此迅速！”
“果然和阿克曼菌分泌的短链脂肪酸有关！”
“破案了，短链脂肪酸不仅能够修复血脑屏障，同时自身还带有抗炎作用，这等于是又治标又治本！能不快才是怪事！”
此时，众人都显得尤为兴奋。
如今已经能够证明，彭月娇突然好转的神经炎症，根源就在于她体内飙升千倍的阿克曼菌！
那么接下来，就是同样重要的溯源了……
这突然野蛮生长的阿克曼菌，又是从何而来？
究竟是不是迷走神经刺激术导致的？
此刻，众人都有些紧张了。
如果能证明这一点，那恐怕许秋就要发现一条崭新的、修复血脑屏障的新路了。
这将会是颠覆性的发现！
他们很期待，想看看许秋打算怎么证明这一点！
很快的，许秋收回目光，将心思放在了新一轮的验证之上。
如今第一个结论已经得到证实。
若是能再明确“迷走神经刺激术，可以增加阿克曼菌”，那彭月娇神经炎症突然得到控制的机制就水落石出了。
不过，这个实验就要复杂很多了。
事实上在此之前，医学界就普遍认为菌群变化是vns的间接效应。
没有人会将其与阿克曼菌联系在一块。
因而眼下，要证明“迷走神经刺激术，可以特异性增加阿克曼菌”，至少需要三个步骤。
许秋琢磨道：“目前已知的是，迷走神经刺激，可以激活肠道的胆碱能通路。
“那么接下来，我们要证明，迷走神经刺激术可以促进粘液分泌，同时，也能够特异性地富集阿克曼菌。”
这就是前两个步骤了。
而最后一个步骤，自然就是反证，通过敲除关键靶点证明“迷走神经刺激术”与“阿克曼菌增加”的强因果关系。
“首先，确定vns可以激活肠道黏液分泌通路。”
这一步，许秋早有规划。
难度并不高。
即便是莫雷蒂、赖光圳等人来进行，也不会有什么阻碍。
这次采取的，是转基因小鼠。
胆碱能神经元绿色荧光、黏液红色荧光双杂交鼠。
不过这次实验，就需要分成三组了。
第一组，vns组。
进行手术，同时迷走神经刺激。
第二组，假手术组。
仅暴露神经，不刺激。
而第三则是阿托品组。
vns+腹腔注射阿托品。
阿托品为胆碱能拮抗剂，这可以直接显示出vns对胆碱能通路的效用！
手术步骤并不复杂。
无非是迷走神经电极植入，以及活体肠道成像窗口。
其实，和在彭月娇身上做vns手术差不多。
只不过，此时的手术对象换成了杂交小鼠。
当然，其实还是有些细微区别的。
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没什么技术含量，研究生都能轻松驾驭。
“接下来，需要监测四项指标。”许秋说道。
其一，血脑屏障完整性。
这个很简单，直接用双光子实时成像血管渗漏就行。
第二，紧密连接蛋白Claudin-5。
Claudin-5是神经功能的守门人，从某种方面来说，血脑屏障的完整性与它有着密不可分的关系。
可以说，这个实验的重要指标，基本上都是靠Claudin-5验证的。
而检测Claudin-5本身，则是主要是靠免疫组化+westernblot（脑微血管）。
随后，是小胶质细胞活化，在皮层进行iba-1免疫荧光。
最后则是血清血脑屏障修复机制，利用气相色谱-质谱来判断，其涉及到了丁酸、乙酸的浓度，以及至关重要的Claudin-5基因敲除！
“这个方案……也做出了很多优化啊。”莫雷蒂有些愕然。
赖光圳等人也不禁点头，目中有着钦佩之色。
许秋的方法，和常规法子比起来，优势大上不少。
比如检验血脑屏障的完整性这一点。
常规手法，是监测分辨菌群的丰度。
而许秋则改换成了双光子实时成像血管渗漏，优点显而易见，便是可以动态观测血脑屏障修复过程。
其次，短链脂肪酸修复血脑屏障这一点，许秋对Claudin-5基因的敲除，堪称妙笔。
没有了Claudin-5基因，小鼠的血脑屏障应当会濒临崩溃。
此时补充短链脂肪酸，若是能够见到血脑屏障渗漏有所改善，则能证明，短链脂肪酸能够修复血脑屏障！
另外，监测小胶质细胞活化也有着巨大优势。
常规方法，只会在实验前、实验后查一次神经炎症。
但，活体小胶质细胞成像却可以实时追踪神经炎症消退。
这能清晰地反应阿克曼菌、短链脂肪酸等等在抗炎方面发挥的作用！
很快，各组实验小鼠都依然准备完毕。
第一件要做的事情，就是确定阿克曼菌已经定值成功，且血清丁酸上升。
经过检测，实验组的阿克曼菌，翻了将近七百倍。
而对照组用的是生理盐水，并无明显变化。
血清丁酸方面，实验组小鼠达到了85个单位，说明血清中丁酸含量已经达到可用的标准。
随后，是检测血脑修复的证据！
双光子成像显示，实验组渗漏面积比、与对照比相较而言，减少了百分之七十！
Claudin-5表达，westernblot灰度值上升百分之一百五十！
足足一点五倍。
这意味着，实验组的血脑屏障非常完整！
而evans蓝渗出，也仅仅只有3.1ug/g左右，差不多只有对照组的一半不到。
evans蓝渗出是能直接反映血脑屏障完整性的指标，这无疑进一步确定了短链脂肪酸对血脑屏障的修复作用！
而最后的神经炎症抑制……
经检测，iba-1免疫荧光实验组细胞数大约每视场只有28个，而对照则则有足足95个，下降了约百分之七十！
此外，脑脊液iL-6，实验组也远远低于对照组。
这两个指标，都意味着进行了阿克曼菌定植的实验组，在血脑屏障修复、神经炎症控制方面，都有着碾压一般的优势！
最终，就是给基因敲除小鼠做实验了。
按理说，敲除了Claudin-5基因后，小鼠的血脑屏障会逐步崩溃，神经炎症也会越发严重。
但，在灌胃丁酸后，小鼠的血脑屏障渗透却得到了明显的改善。
而且脑脊液iL-6也在大幅度下降！
这两个现象，让在场无数人都振奋不已。
前者，意味着短链脂肪酸的确可以修复血脑屏障。
而后者则代表，丁酸盐可独立抗炎！
“难怪控制得如此迅速！”
“果然和阿克曼菌分泌的短链脂肪酸有关！”
“破案了，短链脂肪酸不仅能够修复血脑屏障，同时自身还带有抗炎作用，这等于是又治标又治本！能不快才是怪事！”
此时，众人都显得尤为兴奋。
如今已经能够证明，彭月娇突然好转的神经炎症，根源就在于她体内飙升千倍的阿克曼菌！
那么接下来，就是同样重要的溯源了……
这突然野蛮生长的阿克曼菌，又是从何而来？
究竟是不是迷走神经刺激术导致的？
此刻，众人都有些紧张了。
如果能证明这一点，那恐怕许秋就要发现一条崭新的、修复血脑屏障的新路了。
这将会是颠覆性的发现！
他们很期待，想看看许秋打算怎么证明这一点！
很快的，许秋收回目光，将心思放在了新一轮的验证之上。
如今第一个结论已经得到证实。
若是能再明确“迷走神经刺激术，可以增加阿克曼菌”，那彭月娇神经炎症突然得到控制的机制就水落石出了。
不过，这个实验就要复杂很多了。
事实上在此之前，医学界就普遍认为菌群变化是vns的间接效应。
没有人会将其与阿克曼菌联系在一块。
因而眼下，要证明“迷走神经刺激术，可以特异性增加阿克曼菌”，至少需要三个步骤。
许秋琢磨道：“目前已知的是，迷走神经刺激，可以激活肠道的胆碱能通路。
“那么接下来，我们要证明，迷走神经刺激术可以促进粘液分泌，同时，也能够特异性地富集阿克曼菌。”
这就是前两个步骤了。
而最后一个步骤，自然就是反证，通过敲除关键靶点证明“迷走神经刺激术”与“阿克曼菌增加”的强因果关系。
“首先，确定vns可以激活肠道黏液分泌通路。”
这一步，许秋早有规划。
难度并不高。
即便是莫雷蒂、赖光圳等人来进行，也不会有什么阻碍。
这次采取的，是转基因小鼠。
胆碱能神经元绿色荧光、黏液红色荧光双杂交鼠。
不过这次实验，就需要分成三组了。
第一组，vns组。
进行手术，同时迷走神经刺激。
第二组，假手术组。
仅暴露神经，不刺激。
而第三则是阿托品组。
vns+腹腔注射阿托品。
阿托品为胆碱能拮抗剂，这可以直接显示出vns对胆碱能通路的效用！
手术步骤并不复杂。
无非是迷走神经电极植入，以及活体肠道成像窗口。
其实，和在彭月娇身上做vns手术差不多。
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