第1042章 怪病？真相大白！
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免疫荧光染色！
这个实验步骤的结果，将掲示最终的答案。
若是结合，那彭月娇的怪病，或许有了新的转机。
但如果没有发生结合……恐怕所有人都会再次茫然，研究也将陷入新的怪圈之中！
此刻，即便是莫雷蒂，心情都有些紧张了。
而许秋则依旧平静。
并且，荧光染色的步骤，也经过了他的改良。
相比于常规的“单张玻片仅包被一种抗原”做法，许秋采取的方案，是用聚赖氨酸包被玻片用疏水笔划分三区，三区分别包被活菌、热灭活菌以及1%tritonx-100裂解菌。
这种做法的优势很大。
一来，可以消除玻片表面性质差异导致的结合偏差。
二则是能够同时展示抗原构象变化对结合的影响。
从活菌，到热灭活菌，再到利用去污剂tritonx-100裂解细胞组织获得蛋白的裂解菌液……
说得直白一点，活菌就是全活，热灭活菌就是活一半，而裂解菌则是全死……后者的作用，是用于确定结合只发生在热灭活菌暴露的抗原表位之上。
而且在进行荧光标记时，许秋也微调了所用材料。
此前，他们用的是fitC标记。
它激发488nm，很容易与组织自发荧光混淆。
毕竟生物样本中最常见的自发荧光就是绿色，与fitC标记高度重合，很容易认错。
而许秋，则换成了Alexafluor594标记。
这种标记，激发在590nm，而且颜色为红色！
几乎不会与自发荧光混淆！
“太细节了……”
“连荧光的激发与自发荧光混淆都考虑到了？”
“我之前一直用的fitC标记，有几次碰到的荧光反应很强烈，还以为是出成果了，后来才发现是样本中的脂褐素自己在发光……给我白高兴一场！”
“换用Alexafluor594，则能完全避免这个问题！”
莫雷蒂等人惊叹不已。
而邱伟、张骁等科研人员，则是更加振奋。
这便是他们不愿意错过许秋的实操研究的原因了。
许秋的手术堪称完美。
而他做研究，也讲究精雕细琢。
很多细节上的处理，都极为巧妙。
作为科研人员的他们，看得爽是一回事，另外的关键在于——他们也能借此得到感悟，将同样的手法用在往后的科研之中！
这才是最大的裨益！
……
而在众人目不转睛的注视之中，实验终于到了最后阶段。
荧光染色完成。
接着，是用imagej量化荧光强度，通过对比roi内平均像素值，比较三个区域的结合差异。
所有人都紧张起来。
就连莫雷蒂，都有种手心冒汗的感觉！
这个结果，将决定今晚的努力是否白费了。
许秋的动作却很快。
他直接就开始对比三个区域。
当看到结果时，所有人的眼睛都瞪大了。
活菌区，依旧呈现出微弱非特异性荧光，且平均强度小于15Au。
而1%tritonx-100裂解菌区域，则完全无荧光，意味着无结合。
而中心区域，热灭活菌区，强烈的荧光信号仿佛是一轮诞生于载玻片上的太阳，极其醒目，且平均强度甚至达到了182Au！
足可见结合之激烈！
这一刻，所有人都振奋起来。
“果然……发生了特异性结合！”
“这可比当时埃米尔教授的偶然结合要强烈多了！”
“物化协同，采取β-巯基乙醇还原菌体表面蛋白，释放了被遮蔽的抗原决定簇……这让结合更加顺利地发生！完全是点睛之笔！”
“……”
莫雷蒂等人无比激动。
这一幕，简直是叹为观止！
段善继脸色都激动得涨红，到：“这或许能证明，活菌没法引起怪病，恰恰是死去的嗜沫凝聚杆菌……
“这样就完全能解释通了。不管是埃米尔教授之前碰到的病人，还是彭月娇……他们的发病，都是在嗜沫凝聚杆菌控制了之后！
“此时引发他们怪病的，是已经死去、但仍旧残留在机体内的嗜沫凝聚杆菌！”
当然，直到如今，这仍然只是一个猜想。
毕竟这还只是实验室的结果。
想要验证，唯有做动物模型进行最后的确认。
许秋自然也是知道这一点。
好在，大夏神外研究所这边，最不缺的就是实验动物了。
很快，sd大鼠就被送了过来。
依旧是许秋操刀。
对照组，是健康人的纯化igg。
而实验组，则是患者彭月娇的纯化igg。
经过此前的实验，他们已经可以确定一点，彭月娇的怪病，主要的效应抗体基本上igg了。
毕竟它本身就是慢性免疫反应的主要效应抗体，且可透过血脑屏障攻击神经组织。
具备引发怪病的先天条件。
相比之下，igm分子量大，不容易透出血管，更别提是通过血脑屏障了。
而如今要做的动物实验，就是用健康人的igg与彭月娇的igg，依次与热灭活菌液后的产物进行反应。
若是实验组sd大鼠身上出现类似的表现，则基本上可以证明彭月娇的怪病源于此了。
很快，一批批sd大鼠完成了尾静脉注射。
此后就是漫长的等待了。
这个过程，放在人类，或者是其他大型实验动物身上，可能需要数天，乃至于数周才有可能看到症状。
然而在实验室的大鼠之上，却能迅速捕捉到指标的变化！
最为直接的变化是，实验组，也即模拟彭月娇身体情况的sd大鼠，此时的静息心率开始迅速提升！
并且最为显著的是，实验组大鼠走路开始变得不协调……
这或许代表着，它们的肌群肌力已经出现了变化。
此时，所有人都振奋起来。
彭月娇怪病的表现，就有静息心率提升、右前臂背侧肌群肌力突然大幅度下降！
“还有，检测大鼠的免疫抑制状态、以及排查机体针对移植神经的特异性攻击……”
这些都是彭月娇怪病的典型表现！
此刻众人表情都颇为亢奋。
眼前的实验动物，几乎在完美复现出彭月娇当时的表现，这让他们都有些疯狂了。
折腾了这么久，他们始终没有任何线索。
而如今，犹如黎明破晓，他们总算是看到了希望！
破开彭月娇怪病的希望！
此刻，最兴奋的莫过于埃米尔了。
他等待多年，一直在等第二个病人出现，想要借此找到这一疾病的致病真相。
然而等真碰到了彭月娇，他才发现是自己想得太简单了！
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这个实验步骤的结果，将掲示最终的答案。
若是结合，那彭月娇的怪病，或许有了新的转机。
但如果没有发生结合……恐怕所有人都会再次茫然，研究也将陷入新的怪圈之中！
此刻，即便是莫雷蒂，心情都有些紧张了。
而许秋则依旧平静。
并且，荧光染色的步骤，也经过了他的改良。
相比于常规的“单张玻片仅包被一种抗原”做法，许秋采取的方案，是用聚赖氨酸包被玻片用疏水笔划分三区，三区分别包被活菌、热灭活菌以及1%tritonx-100裂解菌。
这种做法的优势很大。
一来，可以消除玻片表面性质差异导致的结合偏差。
二则是能够同时展示抗原构象变化对结合的影响。
从活菌，到热灭活菌，再到利用去污剂tritonx-100裂解细胞组织获得蛋白的裂解菌液……
说得直白一点，活菌就是全活，热灭活菌就是活一半，而裂解菌则是全死……后者的作用，是用于确定结合只发生在热灭活菌暴露的抗原表位之上。
而且在进行荧光标记时，许秋也微调了所用材料。
此前，他们用的是fitC标记。
它激发488nm，很容易与组织自发荧光混淆。
毕竟生物样本中最常见的自发荧光就是绿色，与fitC标记高度重合，很容易认错。
而许秋，则换成了Alexafluor594标记。
这种标记，激发在590nm，而且颜色为红色！
几乎不会与自发荧光混淆！
“太细节了……”
“连荧光的激发与自发荧光混淆都考虑到了？”
“我之前一直用的fitC标记，有几次碰到的荧光反应很强烈，还以为是出成果了，后来才发现是样本中的脂褐素自己在发光……给我白高兴一场！”
“换用Alexafluor594，则能完全避免这个问题！”
莫雷蒂等人惊叹不已。
而邱伟、张骁等科研人员，则是更加振奋。
这便是他们不愿意错过许秋的实操研究的原因了。
许秋的手术堪称完美。
而他做研究，也讲究精雕细琢。
很多细节上的处理，都极为巧妙。
作为科研人员的他们，看得爽是一回事，另外的关键在于——他们也能借此得到感悟，将同样的手法用在往后的科研之中！
这才是最大的裨益！
……
而在众人目不转睛的注视之中，实验终于到了最后阶段。
荧光染色完成。
接着，是用imagej量化荧光强度，通过对比roi内平均像素值，比较三个区域的结合差异。
所有人都紧张起来。
就连莫雷蒂，都有种手心冒汗的感觉！
这个结果，将决定今晚的努力是否白费了。
许秋的动作却很快。
他直接就开始对比三个区域。
当看到结果时，所有人的眼睛都瞪大了。
活菌区，依旧呈现出微弱非特异性荧光，且平均强度小于15Au。
而1%tritonx-100裂解菌区域，则完全无荧光，意味着无结合。
而中心区域，热灭活菌区，强烈的荧光信号仿佛是一轮诞生于载玻片上的太阳，极其醒目，且平均强度甚至达到了182Au！
足可见结合之激烈！
这一刻，所有人都振奋起来。
“果然……发生了特异性结合！”
“这可比当时埃米尔教授的偶然结合要强烈多了！”
“物化协同，采取β-巯基乙醇还原菌体表面蛋白，释放了被遮蔽的抗原决定簇……这让结合更加顺利地发生！完全是点睛之笔！”
“……”
莫雷蒂等人无比激动。
这一幕，简直是叹为观止！
段善继脸色都激动得涨红，到：“这或许能证明，活菌没法引起怪病，恰恰是死去的嗜沫凝聚杆菌……
“这样就完全能解释通了。不管是埃米尔教授之前碰到的病人，还是彭月娇……他们的发病，都是在嗜沫凝聚杆菌控制了之后！
“此时引发他们怪病的，是已经死去、但仍旧残留在机体内的嗜沫凝聚杆菌！”
当然，直到如今，这仍然只是一个猜想。
毕竟这还只是实验室的结果。
想要验证，唯有做动物模型进行最后的确认。
许秋自然也是知道这一点。
好在，大夏神外研究所这边，最不缺的就是实验动物了。
很快，sd大鼠就被送了过来。
依旧是许秋操刀。
对照组，是健康人的纯化igg。
而实验组，则是患者彭月娇的纯化igg。
经过此前的实验，他们已经可以确定一点，彭月娇的怪病，主要的效应抗体基本上igg了。
毕竟它本身就是慢性免疫反应的主要效应抗体，且可透过血脑屏障攻击神经组织。
具备引发怪病的先天条件。
相比之下，igm分子量大，不容易透出血管，更别提是通过血脑屏障了。
而如今要做的动物实验，就是用健康人的igg与彭月娇的igg，依次与热灭活菌液后的产物进行反应。
若是实验组sd大鼠身上出现类似的表现，则基本上可以证明彭月娇的怪病源于此了。
很快，一批批sd大鼠完成了尾静脉注射。
此后就是漫长的等待了。
这个过程，放在人类，或者是其他大型实验动物身上，可能需要数天，乃至于数周才有可能看到症状。
然而在实验室的大鼠之上，却能迅速捕捉到指标的变化！
最为直接的变化是，实验组，也即模拟彭月娇身体情况的sd大鼠，此时的静息心率开始迅速提升！
并且最为显著的是，实验组大鼠走路开始变得不协调……
这或许代表着，它们的肌群肌力已经出现了变化。
此时，所有人都振奋起来。
彭月娇怪病的表现，就有静息心率提升、右前臂背侧肌群肌力突然大幅度下降！
“还有，检测大鼠的免疫抑制状态、以及排查机体针对移植神经的特异性攻击……”
这些都是彭月娇怪病的典型表现！
此刻众人表情都颇为亢奋。
眼前的实验动物，几乎在完美复现出彭月娇当时的表现，这让他们都有些疯狂了。
折腾了这么久，他们始终没有任何线索。
而如今，犹如黎明破晓，他们总算是看到了希望！
破开彭月娇怪病的希望！
此刻，最兴奋的莫过于埃米尔了。
他等待多年，一直在等第二个病人出现，想要借此找到这一疾病的致病真相。
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