第967章 巨大差距!破解怪病的唯一希望!
常规的抗体提取与纯化办法,是使用proteing柱粗提血清总igg。
这个过程中,抗体亚型分选和聚合体去除其实只能省略。
毕竟这一操作太过繁琐,而且也不是这么简单就能完成分选与去除的。
然而,许秋的方法却截然不同。
段善继甚至看得有些迷糊了。
“你这……做的是什么?”
良久,段善继终于是按捺不住好奇心,咽了下口水后问道。
许秋手中的操作继续。
口里也同步给出了解说:“段教授平日里做的,应该是利用proteing柱粗提血清总igg吧?”
段善继手指颤抖了一下。
听许秋这语气,似乎是要给自己上课了?!
这不对吧?
而一旁的邱伟、张骁等人也是瞪大了眼睛。
等等,不是……这发生了什么!
段教授竟然看不懂许秋的操作目的?
这怎么可能!
众多研究所内的科研人员也赶紧看向操作区。
然而,他们也被许秋那令人眼花缭乱的动作给整晕了,同样是一头的雾水。
事实上,段善继能认出许秋的操作细节,但,却不明白操作目的。
因而此时倒也按下了内心的些许不悦,道:“的确,proteing柱粗提血清总igg是常规手法,你难道有什么创新不成?”
许秋没有回答这个问题。
而是转而提起proteing柱粗提法的缺陷,道:“通过传统粗提取提纯出来的总igg中含有大量非特异性抗体,比如抗食物蛋白抗体,这会直接导致后续交叉反应实验假阳性,导致实验者的严重误判。
“此外,未能够去除的igg聚合体可能通过空间位阻掩盖真实结合位点。
“再者就是,这种情况下,我们没法验证抗体功能活性。即便是部分变性igg丧失结合能力,我们也没法发觉。”
简单来说,就是三点。
一个是不够纯,会导致实验结果不精准。
另一个,是太多影响结合的因素,即便是嗜沫凝聚杆菌与血清结合了,也可能会被遮挡住,难以察觉。
而最后一点,就是实验中出了什么问题导致igg失效甚至是死亡,也没法判断到底是“不结合”,还是“抗体失效”。
这些因素导致的结果是,即便是一路做下来了,最终的elisa信号也可能来自非目标抗体,误判交叉反应存在!
这会严重感染实验结果。
而听完这些,段善继瞳孔微微一缩。
这些问题都真实存在。
但却几乎无解。
许秋能给出这些看法,其实已经说明他的水平相当不低了。
然而……从理论层面找出问题谁都能做到,关键是,根本没法预防啊!
难不成许秋有办法?
想到这,段善继下意识地看向了术区。
此时通过许秋列举的缺点,对许秋的操作步骤进行分析,段善继突然看懂了。
他手指开始颤抖。
嘴皮子也有些哆嗦。
好像……真有用?
不过,邱伟、张骁等人还是一脸的茫然。
而此刻许秋也给出了解释,道:“我对这个方案进行了一定程度的改良。
“首先是预处理。“我采取了melongel预处理,具体步骤是优先去除白蛋白、转铁蛋白,这两占血清蛋白的百分之九十,通过操作,可以提高igg纯度。
“此外,进行gm1亲和层析,这一方法可以仅保留能结合gm1的igg亚群,而它占总体的比例甚至小于百分之五,聚合体掩盖真实结合位点的概率会大大降低。
“最后就是sec去除聚合体,而它能够确保单体igg占比大于百分之九十五。”
随后,许秋一一讲解了操作的细节。
包括各种关键步骤如何处理。
很快,所有人脸上的表情就被惊骇所覆盖了。
其中段善继是最为震撼了。
按照他的预估,用许秋的改良方案进行处理后,特异性能提升三四倍。
而且,经过许秋层析后的单体igg能够有效避免空间位阻,真实反映表位结合能力!
段善继突然有点手痒了。
他忍不住在旁边也做了一个常规方法的抗体提取与纯化。
想要通过对比,看看许秋的方法优势究竟有多大。
不过,说实话,段善继还是很有自信的。
尽管都是常规方法,但段善继手法娴熟,极为专业。
对细节的把控几乎可以说做到了极点。
仅仅是普通的粗提操作,就做得赏心悦目,让邱伟等人都感觉眼前一亮。
很快,段善继也结束了抗体提取与纯化。
随后他迫不及待地将自己的结果与许秋的结果进行对比。
但,令他吃惊的一幕出现了——通过数据对比:自己采取的常规方法,igg与gm1结合od值仅仅只有12。
而许秋处理过的,od值却飙升至35!
所谓od值,其实就是光密度,它经常被用于表示被检测物吸收掉的光密度,通常可以代表测定物质的含量。
而且,被检测物浓度越高,吸光度的值就会越高。
放在这个病例上面。
相同的血清,一致的嗜沫凝聚杆菌菌种,结合od值越大,越能标志着igg与gm1结合,则效果越好。
按理说,两者的结合od值应该不会相差太大。
然而事实上却是,许秋的改良方案,od值几乎是段善继的一点五倍了!
但最令人诧异的还不是这个。
而是……病人的竞争抑制率。
段善继处理过后的样本,竞争抑制率差不多在百分之四十左右。
而许秋,却达到了百分之九十二……
这意味着,粗提igg中存在大量干扰抗体,导致竞争抑制率大幅度降低,严重干扰了实验结果!
“怎么会差距这么大!”
段善继有点难以理解了。
他知道许秋的改良方案算是不错了。
但眼下,直观的数据却给了他一个冷冰冰的答案——他与许秋差得太远!
这一刻,段善继突然有点没法接受了。
到底……谁才是科研大佬,谁才是神经免疫学专家来着?
“还行,还行。你继续。”
段善继默默地盖上了对比数据,嘴角抽搐地说了一句。
许秋倒也没追问。
他并不在乎对比结果。
相比之下,专注于自己内心已经定下的实验方案,才是最重要的。
毕竟如今最有可能在三天之内破开彭月娇怪病真相的,就是自己了。